切片是一种常用的实验技术,用于将生物组织或细胞切成薄片,以便在显微镜下进行观察。以下是切片的基本步骤:
徒手切片
准备材料
准备一个盛有清水的培养皿。
使用左手的拇指、食指和中指夹住实验材料,确保材料伸出食指外约2-3mm,并且左手拿材料要松紧适度。
切片技巧
右手平稳地拿住刀片,并与材料成垂直。
在材料切面上均匀地滴上清水,保持材料湿润。
将刀口向内对着材料,使刀片与材料切口保持平行。
用右手的臂力向自身方向拉切,左手食指一侧抵住刀片的下面,保持刀片平整。
检查切片
连续切下数片后,将刀片放在培养皿的水中稍一晃动,切片即漂浮于水中。
在培养皿内挑选透明的薄片用低倍镜观察检查。
优缺点
优点:不需要复杂设备,方法简便,制片迅速,能观察植物组织的自然色泽和活体结构。
缺点:对于体积过小、太软、太硬的材料则难以切片,且不能制成连续切片。
切片机切片
取材固定
使用化学固定剂使组织细胞保持原有形态结构,防止细胞溶解和腐败。
冲洗、脱水与透明
用水或酒精除去固定液,再用脱水剂脱去水分,透明剂使支持剂易于渗入。
透入与包埋
使支持剂浸透组织,制成蜡块。
切片与贴片
用切片机切成一定厚度的薄片,粘贴在载玻片上。
染色
待切片干燥后,用适当的有机溶剂去掉支持剂,并根据需要染色。
封片
使用透明剂透明,并用胶类物质(如加拿大树胶)封固,使切片能长期保存。
注意事项
切片时,刀的斜度通常设置在5°-8°之间。
对于不同材料,可能需要不同的切片技巧,如叶片的卷成管状或夹在载玻片上等。
切片后,应检查切片的薄度、透明度和组织结构完整性。